KOFEIININ MÄÄRITYS NESTEKROMATOGRAFISESTI

Tarvittavat välineet:

1000 ml mittapullo
500 ml mittapullo
4 kpl 10 ml mittapulloja

Tarvittavat reagenssit:

6,3 g kidevedellistä tai 6,0 g kidevedetöntä NaH2PO4
75 ml ACN (asetonitriili)
kahvia
kaupallista kofeiinia
tislattua vettä

Työohje:

1. Valmista ensin 0,05M NaH2Po2-puskuri (20:80):
a) Punnitse tarkasti 6,3g / 6,0g NaH2PO4 punnitusalustalle. b) Huuhdo fosfaatti hyvin alustalta suppilon avulla 1000 ml:n mittapulloon. Sulje korkki ja sekoita, kunnes fosfaatti on silmämääräisesti liuennut veteen.
c) Täytä pullo merkkiin asti tislatulla vedellä ja sekoita liuosta vielä lopuksi.

2. Valmista ajoliuos:
ACN : 0,05M NaH2PO2
75ml: 425ml

3. Sonikoi ajoliuos ultraäänihauteessa (n.+23C / 15min.).

4. Huuhtele ajoliuoksella koneistoa yön yli ennen kuin ajat näytteet.

5. Valmista kofeiinin kantaliuos punnitsemalla 80 mg kofeiinia ja liuottamalla se 1 l tislattua vettä (=0,08 mg/ml).

6. Tee kantaliuoksesta seuraavat laimennokset:
0,75 ml kantaliuosta / 10 ml puskuria = 0,1 mol/l
0,5 ml kantaliuosta / 10 ml puskuria = 0,05 mol/l
0,25 ml kantaliuosta / 10 ml puskuria = 0,025 mol/l

7. Sonikoi standardit ja kahvinäytteet juuri ennen ajoa.

8. Kirjoita ylös ajo-ohjelma / ajo-olosuhteet:
a) Laitteisto:
b) Ohjelma:
c) Menetelmän nimi:
d) Ajoliuokset:
e) Virtaus ml/min.:
f) Kolonni:
g) Aallonpituus/nm:
h) Paine:
i) Ajoaika:

9. Piirrä tuloksista standardikuvaaja, jossa y-akselilla on piikin korkeus (cm) ja x-akselilla standardien pitoisuudet (mg/ml). Standardikuvaajalta saat laskettua näytteen pitoisuuden. Huomioi tuloksissa laimennokset!